据国际细胞外囊泡学会(ISEV)在2014年的提议,外泌体鉴定3个标志:透射电镜(transmission electron microscope,TEM)、粒径(Nanoparticle Tracking Analysis, NTA)、蛋白标志物(Western Blot,外泌体质谱测试服务, WB)。
外泌体透射电镜TEM鉴定外泌体大小、形态,判断样本是否含有外泌体。
外泌体透射电镜分辨率为0.1~0.2nm,适合外泌体双层囊膜超微结构观察,可观测样本中是否存在外泌体样结构(通常为茶托型或一侧凹陷的半球形),同时可测量外泌体大小。
检测平台:TecnaiTM G2 Spirit BioTWIN
检测结果:三张透射电镜图片,尽可能体现完整的外泌体形态(如有)
检测周期:10-15个工作日
除了用NTA方法,该团队另基于acetylcholinesterase(一种已知的外泌体表达蛋白)评估三种试剂盒提取外泌体的得率。从NTA结果看,对于血1清和血浆样本,Exo-spin的提取量高,是其他两种试剂盒的1-3倍;相对来说,外泌体质谱服务,脑脊髓液的提取率都比较低,ExoQuick?提取得到的外泌体浓度低。从基于acetylcholinesterase的分析结果看,其数值高于NTA方法,外泌体质谱,且Exo-spin得到的外泌体浓度高于其他两种试剂盒。
国际细胞外囊泡学会(ISEV) 在2014年的提议,对于提取获得的外泌体,需要通过以下手段进行确认:
? ? ? 双层囊膜结构是外泌体重要标志之一,但普通光学显微镜难以观察到此种亚显微结构。而透射电子显微镜 (Transmission electron microscope, TEM) 分辨率可达0.1 ~ 0.2 nm,外泌体质谱检测服务,可将被观察物体放大至数百万倍,非常适合进行外泌体双层囊膜超微结构观测。
? ? ? 表观生物技术团队拥有丰富的外泌体电镜样本处理与鉴定经验,可为客户提供高质量外泌体TEM检测服务,获得样本中外泌体典型形态特征图片 (如图一)。